JURNAL PERCOBAAN 8 KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DAN KOLOM

PRAKTIKUM

KIMIA ORGANIK I

                       

                   

NAMA : LISNA WIRANTI

NIM: A1C118001

DOSEN PENGAMPU :

Dr.Drs. SYAMSURIZAL, M.Si.

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN KIMIA

JURUSAN MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN

UNIVERSITAS JAMBI

                                                                             2020

I. Judul : Kromatografi Lapis Tipis dan Kolom

II. Hari, tanggal : Rabu, 29 April 2020

III. Tujuan

       Adapun tujuan dari percobaan ini ialah :

1. Memahami teknik-teknik dasar kromatografi lapis tipis dan kolom.
2. Membuat plat kromatografi lapis tipis dan kolom kromatografi.
3. Memisahkan suatu senyawa dari campurannya dengan kromatografi lapis tipis dan memurnikannya dengan  kolom.
4. Memisahkan pigmen tumbuhan dengan cara kromatografi kolom.

IV. Landasan Teori

     Metode kromatografi merupakan analisis kualitatif dan kuantitatif.  Suatu campuran dapat dipisahkan salah satu cara, misalnya dengan metode kromatografi  yang didasarkan pada persebaran zatnya yaitu fase gerak dan diam. Dari fase tersebut memiliki koefisisen distribusi yang berbeda ini merupakan prinsip penting dari kromatografi. Pemisahan yang sempurna akan terjadi bila campuran senyawa dalam komponen pada fasa (bergerak dan diam) bergerak dengan kecepatan yang berbeda ( Tim kimia organic I, 2020).

     Teknik analisis dengan kromatografi dapat digmanfaatkan sebagai pemisah antara campuran komponen dengan penyusunnya. Komponen-komponen akan terpisah antara fase diam dan fase gerak dikarenakan afinitas dan gaya adhesi dari zat-zat yang dipakai berbeda. Jika suatu zat (analit) cepat menyerap suatu fasa diam maka akan sukar larut pada fasa geraknya sehingga memungkinkan waktu tinggalnya lebih lama didalam kolom dan sebaliknya. Hal ini merupakan prinsip dari cara pemisahan kromatografi (syamsurizal.staff.unja.ac.id).

         Menurut kurniawan (2004),  Pada kromatografi dikenal beberapa istilah yang sering digunakan yaitu:

1. fase diam : pelarut dalam kolom

2. fase gerak : zat akan dikeluarkan dari kolom

3. Eluen : campuran pelarut sebagai fase gerak yang dapat membawa zat sampel di fasa diam.

4. elusi : proses pemisahan campuran dengan berbagai pelarut pada kromatografi kolom

5. analit : zat yang telah terpisah pada kromatografi kolom 

           Menurut nurbaiti (2016), kromatografi terdiri dari 5 jenis, yaitu :

1. kromatografi kertas : pemisahan dengan kertas selulosa murni berdasarkan afinitas dan jenis pelarutnya.

2. kromatografi lapis tipis (TLC) : pemisahan berdasarkan jarak pelarut membawa sampel

3. kromatografi kolom : pemisahan komponen zat dari campuran zatnya.

4. kromatografi gas : pemisahan campuran zat menjadi komponen menggunakan gas melewati serapan yang diam.

         Noda yang mau diamati pada kromatografi akan tampak apabila sampel ditotolkan pada sebuah plat tipis seperti kaca. Silika gel biasa digunakan sebagai fase gerak dengan berbagai fase diam seperti  n-heksan, kloroform, etil asetat, n-butanol , dll. Ini merupakan bentuk dari kromatografi lapis tipis sementara untuk kromatografi kolom juga bisa digunakan fase gerak yang berbeda lebih dari satu dengan satu pelarut sebagai fase diam di dalam kolom untuk menganalisis satu buah sampel yang nantinya fase gerak akan turun dengan warna yang berbeda ( Asih, 2009).

V. Alat dan bahan

1. Bahan
      Petroleum eter
      Aseton
      Daun sampel
      Sukrosa
      CaCO₃
      Selulosa
      Benzene
      Methanol
      Kristal iod
      Kertas saring
      Silika gel
      Asam asetat
      Eter
      Kafein 

2. Alat
      Plat kaca
      Tabung reaksi
      Gelas kimia
      Cawan petri
      Pipa gelas kapiler
      Pensil
      Gelas piala
      Lumpang
      Rotavor
      Oven, kolom dan pipet tetes
      

VI. Prosedur kerja

A. Kromatografi lapis tipis

1. Penyiapan plat

1. Dibersihkan plat kaca kecil dengan air dan methanol, lap dan keringkan dalam oven.
2. Disusun 5 plat diatas kaca dan rekatkan dengan pita selotip.
3. Disebarkan suspensi diatas plat dan ratakan pada kaca dengan satu gerakan dan keringkan dalam oven. NB: suspensi (5 gr silika gel + 10 ml methanol + air suling).

2. Penyiapan bejana

1. Dibuat larutan metano;l : asam asetat : eter : benzene (0,10 : 1 : 3 : 5,9) ml dalam gelas kimia.
2. Dilapisi dinding gelas kimia dengan kertas saring lalu tutup dengan cawan petri.

3. Penyiapan contoh

1. Dikerus 2 buah tablet kandungan kafein dan di ekstraksi dengan 2 ml methanol.
2. Dilarutkan 50 mg kafein standar dengan 1ml methanol dlam tabung reaksi.
3. Masing- masing ekstrak dan larutan di ambil dengan pipa gelas kapiler dan ditotolkan diatas plat TLC berjarak 1 cm dari tepi plat kaca.
4. Dikeringkan noda sample lalu dibubuhkan lagi 3-5 kali disetiap kali kering.

4. Pengembangan

1. Dimasukkan plat kedalam bejana pengembang dibiarkan sampai pelarut mencapai 1 cm dari tepi atas plat.
2. Diangkat plat dari bejana dan tandai garis depan pelarut dengan pensil lalu keringkan.
3. Dimasukkan plat kedalam gelas piala berisi Kristal iod dan tunggu sampai noda tampak.
4. Diangkat plat dan tandai noda lalu hitung dan bandingkan Rf nya.

B. Kromatografi kolom

1. Penyiapan sampel

1. Dilumatklan 10 daun dan rendam 1 jam dalam campuran 90 ml petroleum eter + 10 ml benzene + 30 ml methanol.
2. Disaring lalu ekstraksi  dengan 40 ml air 4 kali.
3. Dipisahkan lapisan organic dan keringkan dengan Na-sulfat anhidrat llau saring lagi.
4. Dipekatkan lapisan organic dalam rotavor.

2. Penyiapan kolom

1. Disiapkan kolom kromatografi dan pipet tetes dan disumbat bagian bawahnya.
2. Dimasukkan suspensi selulosa (0,5 gr selulosa+10 ml PE) Sampai 3-4 CM.
3. Dimasukan  suspensi kalsium karbonat ( 1 gr CaCO₃ + 10 ML PE) Sampai 3-4 cm.
4. Dimasukan suspensi suksrosa ( 2 gr sukrosa + 10 ml PE) sampai 3-4 cm
5. Dimasukan terus pelarut jangan sampai suspensi kering dan udara masuk.
6. Diletakkan kertas saring diantara dan diatas timbunan suspensi agar permukaan dan aliran atau sampel tidak terganggu.

3. Kromatografi kolom

1. Dimasukan larutan sampel  1 cm setelah permukaan pelarut turun.
2. Setelah mendekati permukaan penjerap bilas bagian dalam kolom dengan campuran PE : aseton (6:1) dan terus dimasukkan.
3. Dilihat pemisahan melalui sejumlah pita berwarna. ( pita oren bergerak paling cepat, disusul pita hijau, pita kuning dan hijau).
4. Ditampung tetesan warna yang keluar dari kolom dengan tabung reaksi secara berbeda.
5. Dihentikan pemberian pelarut jika semua warna telah keluar dari kolom.

link vidio :
https://youtu.be/6Xk-OuK3hz8

https://youtu.be/2R2iq_XR1IY

Permasalahan
1. Pada kromatografi lapis tipis di vidio 1 terlihat ketika noda sampel ditotolkan pada kaca digunakan 4 pelarut organik yang berbeda. Analisislah tujuan digunakannya 4 pelarut tersebut.
2. Di vidio pertama sebelum Rf nya diukur plat kaca disemprot lalu di keringkan kembali. Apa maksud dari perlakuan tersebut ?
3. Mengapa komponen bisa melewati fase diam padahal awalnya komponen berada dipermukaan atas sampel pada kromatografi kolom di vidio 2 ?